01

Background

研究背景

5-氨基乙酰丙酸（ALA）是一種新型植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)，在植物生產(chǎn)中能夠起到多種調(diào)節(jié)作用，其中ALA提高植物光合作用效應(yīng)尤為引人關(guān)注。2023年，我們制訂并發(fā)布《5-氨基乙酰丙酸 桃樹施用技術(shù)規(guī)程》團標(TJAASS 88—2023)，規(guī)范了ALA在桃上應(yīng)用標準。但這個規(guī)程是否適用于其它樹種尚不清楚，ALA提高植物葉片光合效率的內(nèi)在機制更需要深入研究。因此，本研究以盛果期‘華山’梨為材料，參照TJAASS 88—2023要求，在果樹開花前一周用ALA稀釋液灌根防寒、在盛花后期噴花以去除過多花朵的基礎(chǔ)上，于幼果發(fā)育期葉片噴施ALA溶液，探討ALA對梨樹葉片光合能力的影響，通過葉片氣體交換參數(shù)、葉綠素快速熒光特性以及葉綠素合成、光合系統(tǒng)II電子傳遞載體相關(guān)基因表達等分析，以期闡釋ALA對梨葉片光合作用的調(diào)控機理。

02

Content

研究內(nèi)容

1. ALA處理顯著促進梨葉片凈光合速率(Pn)等光合氣體交換參數(shù)

梨樹葉片噴施外源ALA后1周，葉片Pn就顯著高于對照。這種效應(yīng)至少持續(xù)5周。5周間，ALA誘導(dǎo)的凈光合速率(Pn)平均增幅29.28%(圖1A)，ALA處理葉片蒸騰速率(Tr)平均比對照高出13.94%(圖1B)。與此類似，ALA處理后梨葉片氣孔導(dǎo)度(Gsw)整體上比對照高出18.73%(圖1C)。而且，梨葉片瞬時羧化效率(Pn/Ci)總平均值比對照增加32.30%(圖1E)，水分利用效率提高11.16%(圖1F)。由此可見，ALA處理提高梨樹葉片光合性能至少可以保持3-4周。

圖1 ALA處理對梨葉片光合氣體交換參數(shù)的影響。

2. ALA處理顯著促進梨葉片內(nèi)源ALA的合成與代謝

本研究結(jié)果顯示，外源ALA處理可以誘導(dǎo)梨樹葉片內(nèi)源ALA含量增加。在ALA處理后5周內(nèi)，外源ALA誘導(dǎo)的內(nèi)源ALA含量增幅達41.99%(圖2A)。在此過程中，外源ALA處理一方面顯著提高內(nèi)源ALA合成能力，5周內(nèi)的平均值提高54.54%(圖2B)；另一方面，在ALA處理后第2周外源ALA處理促進梨葉片內(nèi)源ALA代謝分解。這意味著，外源ALA噴施梨葉片不僅促進內(nèi)源ALA合成，而且促進ALA代謝。外源ALA對內(nèi)源ALA合成的促進效應(yīng)至少保持5周。

圖2 外源ALA對梨葉片內(nèi)源ALA含量(A)、生物合成(B)和代謝能力(C)的影響

3. ALA處理顯著促進梨葉片光合色素的合成

如圖3A所示，ALA處理后第二周開始，處理葉片葉綠素相對含量(SPAD)均顯著高于對照。從圖3B-D看，ALA處理1周后梨樹葉片葉綠素a、葉綠素b以及葉綠素總量均顯著高于對照。盡管第2周兩者Chl b含量沒有差異，但其它時間點的差異均達到顯著水平，說明ALA處理促進梨葉片葉綠素積累，緩解其含量下降。具體來說，ALA處理葉片五周內(nèi)Chl a、Chl b和葉綠素總量的平均值分別比對照高出11.38%、8.59%和10.44%。另外，ALA促進提高梨葉片Chl a/b比值，說明ALA促進葉片葉綠素a積累，但不利于a轉(zhuǎn)化為b。與此類似，ALA處理也可以促進葉片類胡蘿卜素(Car)含量上升(圖3F)，且五周平均值比對照高出16.25%。

圖3 ALA處理對梨葉片光合色素含量的影響。(A)葉綠素相對含量、(B)葉綠素a、(C)葉綠素b、(D)總?cè)~綠素含量、(E)Chla/b比值、(F)類胡蘿卜素含量

4. ALA處理對葉綠素合成相關(guān)基因表達的影響

為探究外源ALA提高梨葉片葉綠素含量的機理，本研究分析了葉片噴施ALA后與ALA以及葉綠素生物合成相關(guān)的主要基因相對表達量。可以看出，催化ALA合成的兩個關(guān)鍵基因HEMA和GSA相對表達量在外源ALA處理后明顯上調(diào)。并且，ALA處理的葉片HEMF基因表達量至少在4周內(nèi)顯著高于對照。類似的情況出現(xiàn)在HEMG(催化原卟啉原Ⅸ生成原卟啉Ⅸ)和CHLH(催化原卟啉Ⅸ螯合Mg2+生成Mg-原卟啉Ⅸ)。CHLH是控制葉綠素生物合成分支的一個基因。從圖中看，ALA處理第1周葉片CHLH相對表達量顯著高于對照。這種效應(yīng)可以維持3周。從整體上看，ALA促進其自身合成、代謝以及轉(zhuǎn)化為葉綠素的編碼基因表達，特別是處理后4周內(nèi)，多數(shù)基因表達均受到不同程度上調(diào)。

圖4 葉綠素生物合成途徑及ALA處理對梨葉片相關(guān)基因表達的影響

5. ALA提高葉綠素合成關(guān)鍵基因PypHEMA和PypCHLH的啟動子活性

為了進一步探究ALA調(diào)控葉綠素合成機制，本研究通過在煙草中進行的GUS染色實驗研究ALA對葉綠素合成過程中關(guān)鍵基因啟動子的影響。結(jié)果表明，外源ALA可以顯著增強PypHEMA和PypCHLH基因啟動子活性。因而，外源ALA處理可能通過上調(diào)內(nèi)源ALA合成關(guān)鍵基因HEMA和葉綠素合成關(guān)鍵基因CHLH啟動子活性，促進基因表達，從而導(dǎo)致梨葉片葉綠素含量提升。

圖5 外源ALA對ALA和葉綠素合成相關(guān)基因啟動子活性的影響

6. 外源ALA處理對梨葉片PSII相關(guān)基因的影響

我們在葉綠素快速熒光曲線中觀察到ALA對梨葉片PSII反應(yīng)中心(PSII-RC)光合電子傳遞效率的促進作用。為了探討其作用機制，我們檢測了ALA處理后5周內(nèi)PSII-RC主要成員編碼基因在梨葉片中的相對表達量。結(jié)果表明，ALA處理可以通過促進PSII-RC核心結(jié)構(gòu)蛋白和其他功能小分子蛋白編碼基因的表達，來維持PSII反應(yīng)中心的穩(wěn)定性，促進植物光合作用。

圖6 PSII反應(yīng)中心結(jié)構(gòu)及ALA處理對梨葉片相關(guān)基因表達的影響

綜上所述，參照TJAASS 88—2023團標《5-氨基乙酰丙酸 桃樹施用技術(shù)規(guī)程》要求用ALA處理梨樹，至少可以在3周以上時間內(nèi)維持較高的葉片光合效率，而且這種效應(yīng)可以表現(xiàn)在多個方面。在葉綠素合成過程中，外源ALA不僅可以促進內(nèi)源ALA合成與代謝，還可以促進葉綠素合成，增加光合色素含量；在光合電子傳遞過程中，ALA促進梨葉片PSII-RC核心蛋白基因表達，提高PSII-RC活性，促進光合電子傳遞和能量轉(zhuǎn)化。至此，我們證明了TJAASS 88—2023標準也適合于梨樹。而且，沒有展示的數(shù)據(jù)表明，ALA處理過的梨單果重增加19.7%，果實可溶性糖含量提高14.5%。這些結(jié)果為ALA在梨生產(chǎn)上應(yīng)用提供了理論依據(jù)。

03

About the author

作者及團隊簡介

論文作者為南京農(nóng)業(yè)大學(xué)果樹學(xué)碩士生王新清，通訊作者為汪良駒教授。

汪良駒 教授

汪良駒教授是江蘇省植物生理學(xué)會植物生長物質(zhì)與生長調(diào)控專委會主任。他于2000年起開始從事ALA在農(nóng)林作物抗逆增產(chǎn)提質(zhì)效應(yīng)及其生物學(xué)基礎(chǔ)研究。其研發(fā)的產(chǎn)品“金村秋”、“禾稼春”和“秀果美”等已經(jīng)大面積應(yīng)用于20多個省市區(qū)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)區(qū)。其團隊先后獲得20多項政府專項資金資助，在國內(nèi)外學(xué)術(shù)期刊發(fā)表與ALA有關(guān)研究論文100余篇，授權(quán)專利20余項，處于5-ALA農(nóng)業(yè)領(lǐng)域研究前沿。